环氧活化偶联介质

1. 产品简介

Epoxy活化偶联介质可用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联,广泛十分广泛。Epoxy-activated QZT 6FF活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质,采用环氧活化的方法活化琼脂糖上的羟基,活化后即可直接用于各种配基的偶联。Epoxy-activated QZT 6FF活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广(偶联氨基、巯基和羟基)的特点。

2. 产品特性

环氧活化偶联介质的理化性质和产品特性如表1所示。

表1 环氧活化偶联介质的理化性质和产品特性

参数

指标

基质*

6%交联琼脂糖凝胶

活化基团

环氧基

形状

球形

介质平均粒径

90 μm (45-165)

活化基团密度

20-40 μmol/ml wet gel

偶联条件

pH 9-13,温度20-40 oC,时间5-24 h

可以在水相或者有机相中偶联

最高流速(25℃)

600 cm/h

推荐流速

<150 cm/h

最高耐压

0.3 MPa (3 bar)

保存

-20 oC(异丙醇)

*:除6FF基质外,也可以提供4B、4FF和6B基质的环氧活化介质。


3. 应用

Epoxy活化偶联介质广泛用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联。具体的操作步骤如下(以10 ml活化胶偶联BSA为例):

    清洗:用10-20倍胶体积的去离子水冲洗(大于5次)保存于异丙醇的环氧活化胶,除去异丙醇,抽干,将10 ml(约7.5 g)加入到30 ml的反应器(磨口三角瓶)中,备用。

偶联:称取100 mg BSA,溶解于15 ml 0.1 M碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(pH 10.5),加入到抽干的活化胶中,在摇床上振荡,37℃偶联12-24 h;反应完毕后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,收集料液用于未偶联 BSA的分析和偶联配基密度的计算,偶联配基的微球水洗后抽干。其他配基的偶联方法与BSA类似,但反应条件(pH、温度、时间、配基加入量)需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。若配基含有游离巯基,可选用0.1 M硼砂-硼酸缓冲液,pH 8.6,通过巯基进行偶联。

(偶联注意事项:偶联氨基可选用pH 9-13的缓冲液,偶联巯基可选用pH 8.6的缓冲液;避免使用可以和环氧基反应的含氨基的缓冲液,可选用磷酸盐、碳酸盐、硼酸盐和氢氧化钠溶液;pH越高、温度越高,偶联速度越高;时间越长,偶联反应越彻底,但偶联条件的选择还要兼顾配基的稳定性。)

封闭:将10 ml抽干的偶联BSA的胶加入到100 ml三角瓶中,加入30 ml 1 mol/L乙醇胺,pH 10.5溶液(或0.1 mol/LTris-HCl,pH 10.5)。反应温度恒定在37 ℃,搅拌速度120 rpm,反应时间4 h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,用去离子水清洗。

清洗:偶联BSA的介质依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)、去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液(pH 8.0)和去离子水充分洗涤(重复交替清洗3次),抽干,去除未反应的配基。

保存:保存于4℃、20%乙醇溶液中。

4 特色服务

(1)提供介质筛选及工艺开发的咨询。

(2)接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。

(3)按客户要求提供各种规格的预装柱。

(4)为客户提供专业的售前和售后服务。


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