羧基活化偶联介质

1. 产品简介

羧基活化偶联介质可用于各种含有氨基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联,广泛十分广泛。ECH-activated QZT 4FF活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质,经过一系列的活化步骤,最终形成活化羧基,在温和的条件下就可以偶联各种带氨基的配基。EAH-activated QZT 4FF活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

2. 产品特性

羧基活化偶联介质的理化性质和产品特性如表1所示。

表1 羧基活化偶联介质的理化性质和产品特性

参数

指标

基质

4%交联琼脂糖凝胶

活化基团

羧基

形状

球形

介质平均粒径

90 μm (45-165)

活化基团密度

12-18 μmol /ml wet gel

偶联条件

pH 4.5, 4 oC–室温, 2-24h

最高流速(25℃)

450 cm/h

推荐流速

150 cm/h

最高耐压

0.3 MPa (3 bar)

保存

-20 oC100%异丙醇)

*:除4FF基质外,也可以提供4B、6FF和6B基质的羧基活化介质。


3. 应用

ECH-activated QZT 4FF活化偶联介质广泛用于各种含有氨基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联。具体的操作步骤如下(以4ml活化胶偶联BSA为例):

(1)将约4 ml ECH活化胶水洗3-5次后抽干,再用稀HCl,pH 4.5溶液清洗2次,抽干后将4 ml ECH活化胶(约3.0 g)加入到10 ml的反应器(磨口三角瓶或离心管)中,备用。

(2)准确称取40 mg BSA溶于4.0 ml稀HCl, pH 4.5溶液,溶解完全后加入84 mg EDC.HCl,溶解完全后测量其pH是否为4.5,否则需调到4.5,备用。

(3)将BSA溶液加入到活化胶中,反应温度恒定在4℃或25℃,摇床中振荡混合(离心管水平放置),转速120 rpm,反应时间24 h(反应前1小时pH有明显的下降,可在15、30、45、60 min时测量pH并加入适量稀NaOH 调pH至4.5)。

(4)反应停止后,静置,取上清离心(3000 g,5 min,室温),收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析,计算偶联的BSA的配基密度;将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。

(5)封闭未反应的ECH:一般不需要封闭,如需封闭未反应的羧基,可在偶联反应后(注意是在清洗前)直接往反应物中加入4.2 ml 1 M 氨基葡萄糖或乙醇胺,继续反应4h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,用去离子水清洗。

(6)清洗

将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)、去离子水、0.1M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液(pH 8.0)和去离子水充分洗涤(重复清洗3次),抽干,去除未反应的配基。

(7)保存

制得的BSA亲和介质保存于4℃、20%乙醇溶液中。

备注:其他配基的偶联方法与BSA类似,但反应条件(温度(4 oC至室温)、时间(4-24 h)、配基加入量)需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。


注意事项:通常用稀盐酸作为偶联溶液,如果选用缓冲液要避免使用含有氨基、羧基、磷酸基的缓冲液。


4.特色服务

(1)提供介质筛选及工艺开发的咨询。

(2)接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。

(3)按客户要求提供各种规格的预装柱。

(4)为客户提供专业的售前和售后服务。


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