NHS活化偶联介质

1. 产品简介

NHS活化偶联介质可用于各种含有氨基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联,广泛十分广泛。NHS-activated QZT 4FF活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质,经过一系列的活化、偶联步骤,最终形成活化酯,在温和的条件下就可以偶联各种带氨基的配基。NHS-activated QZT 4FF活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

2. 产品特性

1 NHS活化偶联介质的理化性质和产品特性

参数

指标

基质

4%交联琼脂糖凝胶

活化基团

NHS

形状

球形

介质平均粒径

90 μm (45-165)

活化基团密度

18-25 μmol /ml wet gel

偶联条件

pH 6-9, 4 oC–室温, 2-24 h

最高流速(25℃)

450 cm/h

推荐流速

150 cm/h

最高耐压

0.3 MPa (3 bar)

保存

-20 oC100%异丙醇)

*:除4FF基质外,也可以提供4B、6FF和6B基质的NHS活化介质。

3. 应用

NHS-activated QZT 4FF活化偶联介质广泛用于各种含有氨基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联。具体的操作步骤如下(以4 ml活化胶偶联BSA为例):

清洗液:1 mM HCl, 100 ml,4度预冷; 偶联缓冲液:0.2 M NaHCO3+0.5 M NaCl, pH 8.3, 50 ml。

(1)准确称取40 mg BSA溶于4.0 ml 0.2 M NaHCO3+0.5 M NaCl,pH 8.3缓冲液,溶解完全后备用。

(2)将约4 ml NHS活化胶用4度预冷的1 mM HCl洗3-5次后抽干,再用0.2 M NaHCO3+0.5 M NaCl, pH 8.3清洗2次,抽干后将4 ml NHS活化胶(约3.0 g)加入到10 ml的反应器(磨口三角瓶或离心管)中(注意:清洗后应立即使用)。

(3)将BSA溶液加入到活化胶中,反应温度恒定在4℃(或室温/25℃),摇床中振荡混合(离心管水平放置),转速120 rpm,反应过夜(或5h)。

(4)反应停止后,静置,取上清离心(3000 g,5 min,室温),收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析(可采用Bradford、Lowry、BCA法,NHS 在280 nm有强吸收,不能采用OD280测定蛋白浓度),计算偶联的BSA的配基密度;将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。

(5)封闭未反应的NHS:将4 ml抽干的BSA亲和胶加入到25ml磨口三角瓶中,加入9 ml 0.5 mol/L乙醇胺+0.5 M NaCl,pH 8.3溶液(或0.1 mol/LTris-HCl,pH 8.3)。反应温度恒定在4℃(或室温/25℃),搅拌速度120 rpm,反应过夜(或5 h)。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,用去离子水清洗。

(6)清洗

将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)、去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液(pH 8.0)和去离子水充分洗涤(重复交替清洗3次),抽干,去除未反应的配基。

(7)保存

制得的BSA亲和介质保存于4℃、20%乙醇溶液中。

备注:其他配基的偶联方法与BSA类似,但反应条件(pH、温度、时间、配基加入量)需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。

注意事项:偶联缓冲液可用碳酸盐和磷酸盐等缓冲液,但绝对不能使用含有氨基的Tris等缓冲液。

 

4 特色服务

(1)提供介质筛选及工艺开发的咨询。

(2)接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。

(3)按客户要求提供各种规格的预装柱。

(4)为客户提供专业的售前和售后服务。


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